Одним из факторов, сдерживающих развитие аквакультуры, являются инфекционные болезни. Из них широко распространены и наносят большой ущерб в прудовых и индустриальных рыбоводных хозяйствах различных регионов РФ такие бактериальные заболевания, как аэромоноз и псевдомоноз [4, c. 11].
Бактерии рода Aeromonas являются возбудителями аэромонозов рыб. Основными возбудителями аэромонозов чаще всего являются: Aeromonas hydrophila (рис. 1), A. sobria, A. salmonicida, A. caveae [3, c. 75]. Заболевание характеризуется септицемией, образованием фурункулов в мышечной ткани с последующим их разрывом и переходом в красноватые язвы, а также значительными изменениями во внутренних органах, быстрым развитием патологических процессов и массовой гибелью рыб (рис. 2). Частота возникновения аэромонозов приводит к снижению экономической эффективности рыбоводческих хозяйств, неоправданному применению антибиотиков и их попаданию в пищевые продукты из рыб, а также к потере товарного качества продукции аквакультуры [5, c. 33; 6, c. 300].
В настоящее время не существует достаточно четкой разработанной схемы выделения и идентификации данного микроорганизма, а значит, и диагностики данного заболевания [2, c. 28]. Названные причины актуализируют исследования в области разработки эффективных тест-систем для индикации возбудителей аэромонозов.
Цель проводимых исследований заключалась в разработке мультиплексной ПЦР-системы для индикации бактерий вида A. hydrophila, A. sobria, A. salmonicida и рода Aeromonas в целом.
Задачи исследований:
1. Выбор гена-мишени бактерий A. sobria, A. salmonicida, A. shydrophila, Aeromonas spp. со специфической последовательностью нуклеотидов.
2. Подбор праймеров для выявления специфических участков ДНК бактерий A. sobria, A. salmonicida, A. hydrophila, а также идентификации участка генома представителей рода Aeromonas в целом.
3. Подбор флуоресцентных зондов и разработка схемы мультиплексной ПЦР для одновременного обнаружения ДНК изучаемых микроорганизмов с детекцией продуктов амплификации в реальном времени.