Основные вещества, определение которых в составе препарата, согласно Европейской фармакопее, является обязательным, относятся к специфическим примесям А (1,3-бис (2-хлорэтил) мочевина), В (1- (2-хлорэтил) -3-циклогексилмочевина) и С (1,3-дициклогексилмочевина) [4], структура которых представлена на рис. 1. Допустимое содержание данных примесей нормируется методом ТСХ.
Метод ТСХ обладает недостаточной точностью и чувствительностью для определения специфических примесей, содержащихся в субстанции в малых количествах [4], в связи с чем для контроля качества при производстве, хранении и транспортировке субстанции препарата «Ломустин» целесообразно использование метода ВЭЖХ-МС/МС высокого разрешения как современного и более совершенного метода анализа [5]. Целью данного исследования являлась разработка метода идентификации и количественного определения специфических примесей А, В и С, а также идентификация возможных продуктов деградации субстанции с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с квадруполь-времяпролетным масс-спектрометрическим детектированием (HPLC-QTOF).
Разработанный нами ВЭЖХ-МС/МС метод разделения и анализа специфических примесей А, В и С в составе субстанции препарата «Ломустин» позволяет проводить идентификацию специфических примесей и продуктов деградации действующего вещества. Анализ свежеприготовленного раствора стандарта субстанции 1- (2-хлорэтил) -3-циклогексил-1-нитрозомочевины показал отсутствие специфических примесей А, В и С в его составе. В ходе исследования установлено, что в процессе хранения растворов стандарта субстанции в течение 7 суток при температуре +4 ºС происходит частичная деструкция 1- (2-хлорэтил) -3-циклогексил-1-нитрозомочевины с образованием специфической примеси В в количестве 1,8 % в пересчете на основное вещество. Предложенный нами метод анализа обладает высокой чувствительностью по данному соединению и может быть применен для выявления специфической примеси В при низких содержаниях ее в составе лекарственного препарата (5 × 10–3 мг/мл). Также метод показал высокую чувствительность к специфической примеси С (5 × 10–4 мг/мл).