В настоящее время глобальной проблемой здравоохранения является быстрое распространение по миру штаммов бактерий, резистентных к большому числу антибактериальных препаратов [1], в том числе и препаратов резерва, к которым относятся карбапенемы. Ведущим механизмом, обуславливающим устойчивость грамотрицательных бактерий к карбапенемам, является продукция ферментов карбапенемаз [2]. Карбапенемазы представляют собой огромную угрозу из-за высокой каталитической активности и широкого спектра субстратной специфичности, проявляя гидролитическое действие в отношении не только карбапенемов, но и всех антибиотиков β-лактамного ряда [3, 4]. Однако выявление продуцентов карбапенемаз традиционными бактериологическими методами имеет ряд сложностей, особенно в случае носителей генов-карбапенемаз KPC и OXA-48. В связи с этим актуальной проблемой становится своевременное и достоверное определение карбапенем-устойчивых микроорганизмов для контроля распространения резистентных штаммов и назначения своевременной адекватной терапии пациентов. Использование молекулярных методов диагностики, в частности ПЦР, для выявления генетических маркеров резистентности представляется наиболее перспективным направлением, способным дополнить традиционную бактериологию и повысить качество проводимых исследований.
Разработка молекулярно-диагностических методов для выявления карбапенем-устойчивых Klebsiella pneumoniae. Для выполнения цели работы были поставлены следующие задачи:
• провести сбор и характеристику коллекции штаммов представителей семейства Enterobacteriaceae;
• разработать дизайн тестсистемы для обнаружения карбапенем-устойчивых штаммов K. pneumoniae, несущих гены blaKPC и blaOXA-48;
• провести апробацию созданной тест-системы на собранной коллекции микроорганизмов.
Материалы и методы — указаны вместе с результатами каждого этапа работы.
1. Сбор коллекции микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae и характеристика штаммов