Успехи в области искусственного осеменения и трансплантации зародышей животных создали условия для развития и внедрения в клиническую практику новых вспомогательных репродуктивных технологий: сексирование спермы, предимплантационное определение пола зародышей, репродуктивное клонирование, создание химер и трансгенных животных (Кузьмина Т.И., 2009; Дюльгер Г.П., Храмцов В.В., Нежданов А. Г., 2014; Дюльгер Г.П., 2015).
Сексирование спермы. Сексированная сперма – это сперма производителей, разделенная по «ядерному» полу (носительству Х- или Y-хромосомы). Начиная с 2000 г. сексированная сперма достаточно широко используется в практике воспроизводства крупного рогатого скота. Впервые теленок с применением свежеполученной сексированной спермы был получен в 1997 г. (Seidel G. E. et al., 1997), замороженно-оттаянной – в 1999 г., а теленок с использованием сексированных спермиев в процедуре ЭКО (экстракорпоральное оплодотворение) родился в 2006 г. (Puglisi R. et al., 2006).
Для сексирования спермы применяют лазерные высокоскоростные проточные цитометры, оборудованные системой для электростатической сортировки клеток.
Принцип метода проточной цитометрии основан на регистрации флюоресценции и светорассеивания от каждого отдельного спермия, предварительно окрашенного ДНКспецифическим витальным красителем. В проточной кварцевой кювете за счет разницы давлений между анализируемым образцом спермы и обтекающей жидкостью спермии вводятся в ламинарный поток (выстраиваются в цепочку один за другим) и пересекают сфокусированный лазерный луч. Высокочувствительные детекторы регистрируют флюоресценцию и рассеянное излучение (боковое и прямое) каждой половой клетки. Световые сигналы передаются в компьютер, где они усиливаются и преобразуются в электрические импульсы фотоумножительным устройством. Далее информация обрабатывается в цифровом режиме в виде гистограмм. По разности в интенсивности ДНК-флуоресценции (спермии быка, несущие Y-хромосому, содержат на 3,8% меньше ДНК, чем спермии, несущие Х-хромосому) компьютер в режиме реального времени идентифицирует гоносому анализируемой половой клетки.