По всем вопросам звоните:

+7 495 274-22-22

УДК: 619:637.075-578.81

Разработка способа использования индикаторных фагов для идентификации сальмонелл

Е. Чугунова канд. вет. наук, доцент, ФГБОУ ВО «Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д. Н. Прянишникова», 614990, Россия, г. Пермь, ул. Петропавловская, д. 23. E-mail: chugunova.elen@yandex.ru
Н. Татарникова д-р вет. наук, проф., ФГБОУ ВО «Пермская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д. Н. Прянишникова», 614990, Россия, г. Пермь, ул. Петропавловская, д. 23

В статье рассмотрен вопрос идентификации сальмонелл с помощью индикаторных бактериофагов. Целью научных исследований явилась разработка схемы фагоидентификации бактерий рода Salmonella. Исследование проводилось в бактериологическом отделе ГБУВК «Пермский ветеринарный диагностический центр» в период с 2014 по 2017 г. Работали с референтными и полевыми штаммами Salmonella spp., Escherichia coli, Shigella fl exneri, Proteus spp., Staphilococcus aureus и Listeria monocytogenes (всего 131 штамм). Для получения бактериофагов использовали белых лабораторных разнополых мышей массой 16–18 г (n = 22). В целях исследования из суточных агаровых культур изучаемых микроорганизмов с помощью оптического прибора Densi-La-Meter (Erba Lachema, Чехия) готовили исходную бактериальную суспензию, содержащую 108 МТ/см3 . Далее делали ряд последовательных разведений до получения суспензии c 101 МТ/см3 . В итоге инокулюм, содержащий 10 МТ сальмонелл, вносили в 9,0 см3 селенитового бульона и аналогичный объем RVS-бульона, добавляли индикаторный фаг в количестве от 0,1 до 3,0 см3 . В результате установили, что совместная инкубация сальмонелл и одноименного фага в селенитовом и RVS-бульонах способствует лизису бактерий рода Salmonella, что может служить диагностическим признаком идентификации сальмонелл. Проведя аналогичный опыт с микробами-ассоциантами, визуализировали разной степени помутнение и/или наличие осадка, что позволило сделать вывод о высокой чувствительности предложенного способа идентификации искомых бактерий. Разработанный способ идентификации сальмонелл с использованием выделенных бактериофагов превзошел классический аналог по ряду показателей: по чувствительности, эффективности, материальным, трудовым затратам и позволил сэкономить 24 ч времени.

Литература:

1. Barry A. L., Badal R. E. Rapid identifi cation of Enterobacteriaceae with the micro-ID system versus API 20 E and conventional media // Clin Microbiol. – 1979. – Vol. 10. – P. 293–298.

2. Zaremba M., Sabaniec H., Boroqski J. Evaluation of the Micro-ID kit for the identifi cation of bacteria of the Enteerobacteriaceae family // Med Dosw Microbiol. – 1985. – Vol. 37. – P. 25–31.

3. Holmes B., Humphry P. S. Identifi cation of Enterobacterioceae with the Minitek System // J. Appl Bacteriol. – 1988. – Vol. 64 (2). – P. 151–161.

4. Keelan S. L., Flowers R. S., Robison B. J. Multitest system for biochemical identifi cation of Salmonella, Escherichia Coli, and other Enterobacteriaceae isolated from foods: collaborative study // J. Assoc Off Anal Chem. – 1988. – Vol. 71 (5). – P. 968–972.

5. Hinnebusch C. J., Nikolai D. M., Bruckner D. A. Comparison of API Rapid Strep, Baxter MicroScan Rapid Pos ID Panel, BBL Minitek Diff erential Identifi cation System, IDS Rapid STR System, and Vitek GPI to conventional biochemical tests for identifi cation of viridans streptococci // Am J Clin Pathol. – 1991. – Vol. 96 (4). – P. 459–463.

6. O’Hara C. M., Tenover F. C., Miller J. M. Parallel comparison of accuracy of API 20E, Vitek GNI, MicroScan Walk/Away Rapid ID, and Bection Dickinson Cobas Micro ID-E/NF for identifi cation of members of the family Enterobacteriaceae and common gramnegative, non-glucose-fermenting bacilli // J. Clin Microbiol. – 1993. – Vol. – № 31 (12). – P. 3165–3169.

7. O’Hara C. M., Rhoden D. L., Miller J. M. Revaluation of the API 20E identifi cation system versus conventional biochemical for identifi cation of members of the family Enterobacteriaceae: a new look at an old product // J. Clin Microbiol. – 1992. – Vol. 30. – P. 123–125.

Согласно действующей нормативной документации, сальмонеллы, выделенные из испытуемой продукции, должны быть идентифицированы по биохимическим свойствам. Процедура типизации выделенных бактерий с использованием сред Гисса достаточно трудоемка, а имеющиеся альтернативные методы (API, ELISA, ЭНТЕРОтест24H и пр.) приводят к повышению себестоимости исследований [1–11]. Также необходимо учитывать возможность наличия атипичных биохимических свойств у одного и того же серотипа сальмонелл и необходимость постановки биологической пробы с регистрацией наблюдаемых изменений [12, 13]. Данные аргументы диктуют необходимость поиска новых методов идентификации бактерий, для чего могут быть использованы бактериофаги как высокоспецифичные биологические объекты.

Ряд ученых для детекции патогенных бактерий в объекте исследования рекомендуют применять реакцию нарастания титра фагов (РНФ), принцип которой основан на добавлении в питательную среду с испытуемым образцом индикаторного фага в точно учтенном количестве и последующей инкубации данной смеси [14–18]. При этом фаг адсорбируется на гомологичных бактериях, если они имеются в исследуемом образце, и вызывает у них лизис с последующим выходом в среду новых вирионов фага. Возрастание титра фага в несколько раз свидетельствует о наличии в испытуемой пробе соответствующих бактерий. Благодаря высокой специфичности индикаторный фаг не реагирует на присутствие посторонней микрофлоры, что дает возможность провести индикацию возбудителя без его выделения в чистой культуре [19].

Очевидными недостатками процедуры постановки РНФ являются затраты времени для размножения фага в среде с испытуемым образцом, необходимость приобретения дорогостоящих импортных мембранных фильтров для очистки лизатов от бактерий и их частиц и дополнительные затраты времени на образование негативных колоний на двухслойном агаре. Поэтому считаем актуальной разработку оптимального способа использования индикаторных фагов для идентификации бактерий.

Для Цитирования:
Е. Чугунова, Н. Татарникова, Разработка способа использования индикаторных фагов для идентификации сальмонелл. Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2018;11.
Полная версия статьи доступна подписчикам журнала
Язык статьи:
Действия с выбранными: