По всем вопросам звоните:

+7 495 274-22-22

УДК: 57.085.23 DOI:10.33920/MED-12-2101-10

Разработка перфузионного культивирования клеток СНО в колбах Эрленмейера для дальнейшего трансфера процесса в биореактор

Смирнов Александр Алексеевич магистр 6-го курса кафедры биотехнологии и промышленной фармации, РТУ МИРЭА (ИТХТ); 119571, г. Москва, пр-т Вернадского, д. 86; +7 (925) 020 2497; E-mail: botnik@mail.ru; https://orcid.org/0000-0001-7022-6249
Заворуева Мария Николаевна магистр 6-го курса кафедры биотехнологии и промышленной фармации, РТУ МИРЭА (ИТХТ); 119571, г. Москва, пр-т Вернадского, д. 86; E-mail: masha. zavorueva@yandex.ru; https://orcid.org/0000-0003-0117-8276
Елисеева Вера Вячеславовна магистр 6-го курса кафедры химии и технологии биологически активных соединений, медицинской и органической химии им. Преображенского Н.А., РТУ МИРЭА (ИТХТ); 119571, г. Москва, пр-т Вернадского, д. 86; E-mail: veraeliss@yandex.ru; https://orcid.org/0000-0002-8383-7441
Мазалёв Денис Алексеевич магистр 6-го курса кафедры биотехнологии и промышленной фармации, РТУ МИРЭА (ИТХТ); 119571, г. Москва, пр-т Вернадского, д. 86; E-mail: denmazalev97@ bk.ru; https://orcid.org/0000-0002-9952-8184
Кувшинов Виктор Андреевич магистр 6-го курса кафедры биотехнологии и промышленной фармации, РТУ МИРЭА (ИТХТ); 119571, г. Москва, пр-т Вернадского, д. 86; E-mail: vikkerkikker@ yandex.ru; https://orcid.org/0000-0001-8126-593X
Семихина Анастасия Олеговна ассистент базовой кафедры Иммунологическая химия, РТУ МИРЭА (ИТХТ), г. Москва; E-mail: anastasiya_dano@mail.ru; https://orcid.org/0000-0002-2068-373X

В статье рассмотрена актуальность и проблемы перфузионного культивирования клеток CHO, предложено моделирование перфузионного культивирования в колбах Эрленмейера.

Литература:

1. Gupta S.K. Metabolic engineering of CHO cells for the development of a robust protein production platform / S.K. Gupta, S.K. Srivastava, A. Sharma, et al. // PLoS ONE. 2017; 12 (8): 23 p.

2. Sha S. Mechanistic modeling and applications for CHO cell culture development and production / S. Sha, Z. Huang, Z. Wang, et al. // Current Opinion in Chemical Engineering. 2018; 22: 54–61.

3. Jukić S. Adaptation of CHO cells in serum-free conditions for erythropoietin production: Application of EVOP technique for process optimization / S. Jukić, D. Bubenik, N. Pavlović, et al. // Biotechnol Appl Biochem. 2016; 63 (5): 633–641.

4. Qin J. The effect of hyperosmolality application time on production, quality, and biopotency of monoclonal antibodies produced in CHO cell fed-batch and perfusion cultures / J. Qin, X. Wu, Z. Xia, et al. // Biotechnological products and process engineering. 2018; 103: 1217–1229.

5. Sharma S. Bioreactors: A Rapid Approach for Secondary Metabolite Production / S. Sharma, A. Shahzad // Recent Trends in Biotechnology and Therapeutic Applications of Medicinal Plants; 2013: 25–50.

6. Karst D.J. Continuous integrated manufacturing of therapeutic proteins / D.J. Karst, F. Steinebach, M. Morbidelli // Current Opinion in Biotechnology. 2018; 53: 76–84.

1. Gupta S.K. Metabolic engineering of CHO cells for the development of a robust protein production platform / S.K. Gupta, S.K. Srivastava, A. Sharma, et al. // PLoS ONE. 2017. № 12 (8). — 23 p.

2. Sha S. Mechanistic modeling and applications for CHO cell culture development and production / S. Sha, Z. Huang, Z. Wang, et al. // Current Opinion in Chemical Engineering. 2018. № 22. p. 54–61.

3. Jukić S. Adaptation of CHO cells in serum-free conditions for erythropoietin production: Application of EVOP technique for process optimization / S. Jukić, D. Bubenik, N. Pavlović, et al. // Biotechnol Appl Biochem. 2016. № 63 (5). p. 633–641.

4. Qin J. The effect of hyperosmolality application time on production, quality, and biopotency of monoclonal antibodies produced in CHO cell fed-batch and perfusion cultures / J. Qin, X. Wu, Z. Xia, et al. // Biotechnological products and process engineering. 2018. № 103. p. 1217–1229.

5. Sharma S. Bioreactors: A Rapid Approach for Secondary Metabolite Production / S. Sharma, A. Shahzad // Recent Trends in Biotechnology and Therapeutic Applications of Medicinal Plants. 2013. p. 25–50.

6. Karst D.J. Continuous integrated manufacturing of therapeutic proteins / D.J. Karst, F. Steinebach, M. Morbidelli // Current Opinion in Biotechnology. 2018. № 53. p. 76–84.

Биофармацевтика занимает всё больший сектор в производстве лекарств. Это связано как с учащением хронического течения заболеваний и общим старением населения, так и с развитием самого направления. Еще в 2014 г. мировой биофармацевтический рынок оценивался в 162 млрд долл. США, а на 2020 г. прогнозируемый объем рынка составит 278 млрд [1, p. 1].

В биофармацевтическом производстве доминируют клетки CHO (клетки яичника китайского хомячка). Они используются при получении, в частности, моноклональных антител, используемых в терапии рака, аутоиммунных заболеваний, заболеваний крови. Основным методом культивирования клеток млекопитающих на данный момент является периодическое культивирование с подпиткой, или фед-батч. Фед-батч позволяет получать высокие концентрации продукта в культуральной жидкости. Однако в процессе культивирования в среде накапливаются метаболиты, которые могут нарушить процесс и ухудшить качество самого продукта. К основным метаболитам процесса культивирования относятся аммиак и молочная кислота. Последняя быстро накапливается в среде в виде лактата в результате неконтролируемого метаболизма глюкозы в пируват, что ведет к закислению среды. Добавляемая в среду щелочь для нейтрализации молочной кислоты ведет, в свою очередь, к увеличению осмотического давления, что влияет на качество продуцируемых моноклональных антител. Кроме того, необходимо поддерживать постоянный уровень источников углерода, азота, энергии и антиоксиданта (NADPH), без которых невозможен анаболизм целевых белков [1, p. 1–2; 2, p. 3; 3, p. 633; 4, p. 1218].

В отличие от фед-батч-процесса, который подразумевает культивирование с последующим постепенным добавлением подпитки, непрерывное культивирование включает в себя постепенное удаление части объема среды и/или клеток с восполнением свежей средой (хемостат, перфузия). В случае перфузии клетки полностью или частично задерживаются в биореакторе, а отток использованной питательной среды равен притоку свежей. Это позволяет существенно снизить проблемы, связанные с накоплением метаболитов, повышенной осмолярностью, а также ограничениями по количеству питательных веществ, что дает возможность достигнуть значительно большей клеточной концентрации в биореакторе и более высокой производительности единицы оборудования (до 5–10 раз выше по сравнению с периодическим процессом). Помимо прочего, цикл культивирования в режиме фед-батч в среднем составляет две недели, а слив продукта происходит одномоментно в полном объеме. В то же время цикл перфузионного культивирования может длиться более месяца, и получение продукта распределено непрерывно по всему циклу. Это делает нагрузку на производственные мощности, в частности хроматографическую очистку, более равномерной [4, p. 1217–1218; 5, p. 27; 6, p. 77].

Для Цитирования:
Смирнов Александр Алексеевич, Заворуева Мария Николаевна, Елисеева Вера Вячеславовна, Мазалёв Денис Алексеевич, Кувшинов Виктор Андреевич, Семихина Анастасия Олеговна, Разработка перфузионного культивирования клеток СНО в колбах Эрленмейера для дальнейшего трансфера процесса в биореактор. Терапевт. 2021;1.
Полная версия статьи доступна подписчикам журнала
Язык статьи:
Действия с выбранными: