Цель исследования: подтвердить в условиях лаборатории, что методика определения титра вируса псевдобешенства (болезни Ауески) способна обеспечить получение ожидаемых результатов, при этом получаемые результаты воспроизводимы и достоверны.
Вирус болезни Ауески SuHV-1, клеточная линия Vero B, среда ДМЕМ, содержащая глюкозу 1 г/л, сыворотка бычья фетальная (FBS), антибиотики пенициллин — стрептомицин (100 МЕ/мл и 0,1 мкг/мл).
При приготовлении ростовой среды для культивирования клеточной культуры в 450 мл среды ДМЕМ добавляли 45 мл FBS и 4,5 мл раствора антибиотиков пенициллин — стрептомицин (100 МЕ/мл и 0,1 мкг/мл). В качестве поддерживающей среды использовали питательную ДМЕМ без FBS и антибиотиков. Пересев клеток осуществляли каждые 72–96 часов. Культивирование осуществляли в СО2-инкубаторе при температуре 37,0 ± 1,0 °С и содержании углекислого газа 5,0 ± 1,0 %, с влажностью не менее 80 %.
Характер ЦПД вируса SuHV-1 в культуре клеток Vero B спустя 48 ч после инкубирования представлен полной деструкцией монослоя, формированием клеток округлой формы. В лунках с контрольной культурой клеток Vero B отсутствовали проявления ЦПД, что подтверждает специфичность методики.
Результаты оценки прецизионности (повторяемости, сходимости) и устойчивости (внутрилабораторной воспроизводимости) соответствовали разработанной методики. Таким образом, прецизионность (повторяемость, сходимость) валидируемой методики составляет не более 3,26 %, а устойчивость (воспроизводимость) — не более 1,65 %, что для обеих характеристик удовлетворяет критерию приемлемости.
В результате валидации подтверждена специфичность, удовлетворительный уровень повторяемости (сходимости) и устойчивости (внутрилабораторной воспроизводимости) методики определения титра вируса псевдобешенства (болезни Ауески) на культуре клеток Vero B. Методика может быть использована при проведении скрининга для оценки снижения цитопатического действия (ЦПД) на модели повреждения клеток Vero B вирусом псевдобешенства (болезни Ауески).