В настоящее время глобальной проблемой здравоохранения является быстрое распространение по миру штаммов бактерий, резистентных к большому числу антибактериальных препаратов [1], в том числе и препаратов резерва, к которым относятся карбапенемы. Ведущим механизмом, обуславливающим устойчивость грамотрицательных бактерий к карбапенемам, является продукция ферментов карбапенемаз [2]. Карбапенемазы представляют собой огромную угрозу из-за высокой каталитической активности и широкого спектра субстратной специфичности, проявляя гидролитическое действие в отношении не только карбапенемов, но и всех антибиотиков β-лактамного ряда [3, 4]. Однако выявление продуцентов карбапенемаз традиционными бактериологическими методами имеет ряд сложностей, особенно в случае носителей генов-карбапенемаз KPC и OXA-48. В связи с этим актуальной проблемой становится своевременное и достоверное определение карбапенемустойчивых микроорганизмов для контроля распространения резистентных штаммов и назначения своевременной адекватной терапии пациентов. Использование молекулярных методов диагностики, в частности ПЦР, для выявления генетических маркеров резистентности представляется наиболее перспективным направлением, способным дополнить традиционную бактериологию и повысить качество проводимых исследований.
Разработка молекулярно-диагностических методов для выявления карбапенем-устойчивых Klebsiella pneumoniae. Для выполнения цели работы были поставлены следующие задачи:
• провести сбор и характеристику коллекции штаммов представителей семейства Enterobacteriaceae;
• разработать дизайн тест-системы для обнаружения карбапенем-устойчивых штаммов K. pneumoniae, несущих гены blaKPC и blaOXA-48;
• провести апробацию созданной тест-системы на собранной коллекции микроорганизмов.
Материалы и методы — указаны вместе с результатами каждого этапа работы.
В коллекцию вошли 80 бактериальных штаммов представителей семейства Enterobacteriaceae, полученных из клинико-диагностической лаборатории (КДЛ) ООО «Лаборатория Литех» и НИИ СП им. Н.В. Склифосовского. Включение штаммов в экспериментальную выборку проводили согласно следующим критериям: принадлежность бактерии к семейству Enterobacteriaceae [5], преимущественно к виду K. pneumoniae; фенотипическая устойчивость части штаммов K. pneumoniae к имипенему и меропенему; фенотипическая чувствительность части штаммов K. pneumoniae к имипенему и меропенему.