В настоящее время пополнение естественных популяций осетровых рыб, а также их товарное выращивание осуществляются за счет эксплуатации созданных на рыбоводных предприятиях маточных стад. В связи с объявленным Российской Федерацией и прикаспийскими государствами мораторием на лов осетровых видов рыб в Волжско-Каспийском рыбохозяйственном бассейне (белуги с 2000 года, осетра и севрюги с 2005 года) заготовка производителей для целей воспроизводства не производится. В связи с этим генетический ресурс существующих маточных стад истощается, а потомство, полученное в результате близкородственного скрещивания, менее жизнеспособно и продуктивно.
Использование криоконсервированной спермы осетровых видов рыб искусственной генерации других поколений (1980-х, 1990-х годов и др.) либо особей, заготовленных в период благополучного состояния естественной популяции, для оплодотворения икры позволит сохранить генофонд редких и исчезающих видов [1; 4; 6]. Особое значение в сохранении генетического разнообразия осетровых имеет севрюга, естественная популяция которой находится в критическом состоянии — на грани исчезновения.
Цель работы: изучение оплодотворяющей способности криоконсервированной и нативной спермы севрюги; изучение рыбоводно-биологических показателей и генетического разнообразия молоди севрюги, полученной с использованием криоконсервированной спермы при выращивании в индустриальных условиях.
До начала эксперимента были проведены молекулярно-генетические исследования. Фрагменты плавников производителей севрюги были отобраны прижизненно на НЭКА «БИОС» в соответствии МР 4.2.001-2015 [8]. Образцы криоконсервированной спермы были отобраны из коллекции низкотемпературного генетического банка филиала по пресноводному рыбному хозяйству ФГБНУ «ВНИРО» (ВНИИПРХ). Все генетические пробы были зафиксированы в 95%-ном этаноле. Выделение и последующую очистку тотальной ДНК проводили на адсорбционных колонках [12]. Препараты ДНК использовали для микросателлитного анализа. Амплификация ДНК, выделенной из образцов, осуществлялась в термоциклерах Thermo Cycler С-1000, S-1000 (Bio-Rad, USA). Образцы ядерной ДНК проанализированы по пяти микросателлитным локусам An20, Afug41, Afug51, AoxD165, AoxD161 с флуоресцентными метками, условия проведения ПЦР оптимизированы для осетровых видов рыб [2]. Амплифицированные продукты подвергали электрофоретическому разделению с помощью системы капиллярного электрофореза ABI-3500 Genetic Аnalyzer (Applied Biosystems, USA), идентифицируя длины фрагментов ДНК в компьютерной программе GeneMapper 4.1. Для самок и образцов криоконсервированной спермы севрюги были рассчитаны коэффициенты генетического родства [7], с учетом которых осуществлялась комплектация родительских пар. Для оценки генетического разнообразия молоди севрюги определяли количество аллелей и их частоты, наблюдаемую и ожидаемую гетерозиготность, используя специализированный макрос GenAlEx 6.41 для MS Excel [13].