По всем вопросам звоните:

+7 495 274-22-22

УДК: [597.08:612.017]

Индикация и идентификация некоторых особо опасных вирусов рыб методом ПЦР

Е.А. Завьялова канд. биол. наук, ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко», Москва, Россия
Н.Ю. Кандрина ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко», Москва, Россия, natalia.kandrina@gmail.com
Н.Ф. Ломакина ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко», Москва, Россия
М.И. Гулюкин ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко», Москва, Россия

Целью настоящего исследования являлась разработка тест-систем для индикации и идентификации вирусов-возбудителей особо опасных и карантинируемых заболеваний карповых и лососевых рыб методом ПЦР. В результате работы были подобраны праймеры, для идентификации SVCV, IPNV, IHNV, VHSV, согласно референтным последовательностям консервативных участков генома, оптимизированы условия выделения РНК, проведения обратной транскрипции и ПЦР, таким образом, что общее время анализа не превышало четырех часов. Была проведена идентификация штаммов, референтных и полевых, имеющихся в лаборатории ихтиопатологии и выделенных в разные годы в рыбоводческих хозяйствах. Данные, полученные в ходе исследований с применением ПЦР, коррелировали с результатами, полученными другими методами: в ИФА, в реакции нейтрализации, методом электронной микроскопии, при этом были получены в более короткие сроки.

Литература:

1. Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals, OIE; Ed.: 2006.

2. Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals. OIE; Ed.: 2009.

3. Завьялова Е.А., Дрошнев А.Е., Кандрина Н.Ю., Калинина Н.Р. Выделение возбудителя вирусной геморрагической септицемии лососевых от рыб в естественных водоемах / Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчел». – М., 2011. – С. 75–77.

4. Williams K., Blake S., Sweeney A., Singer J.T., Nicholson B.L. Multiplex reverse transcriptase PCR assay for simultaneous detection of three fish viruses // J. of clinical microbiology., – 1999 – No. 12., Vol. 37: p. 4139–4141.

5. Lopez-Lastra M., Gonzalez M., Jashes M., Sandino A.M. A detection method for infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) based on reverse transcription (RT) – polymerase chain reaction (PCR) // J. of fish diseases., – 1994. – № 17. – Р. 269–282.

6. Heppel J., Berthiaume L., Tarrab E., Lecomte J. Evidence of genomic variations between infectious pancreatic necrosis virus strains determined by restrictions fragment profiles // J. of general virology. – 1992. – № 73. – Р. 2863–2870.

Аквакультура в России носит комплексный многоотраслевой характер за счет использования крупнейшего в мире фонда внутренних водоемов и прибрежных акваторий морей. При этом одна из существенных проблем отечественной акваиндустрии – дефицит рыбопосадочного материала, который рыбоводам приходится закупать в Финляндии, Норвегии и других европейских странах. В этих регионах у рыб в естественных водоемах и в аквакультуре циркулируют возбудители таких особо опасных вирусных болезней – инфекционный некроз поджелудочной железы лососевых, инфекционная анемия лососевых, вирусная геморрагическая септицемия и другие. Во всем мире главное направление в борьбе с заразными болезнями рыб и других гидробионтов – профилактика, то есть предотвращение проникновения патогенов в регионы, где их прежде не было. Таким образом, завоз рыбопосадочного материала в Российскую Федерацию из стран с различной эпизоотологической ситуацией требует мониторинга и прогнозирования на основе возможных рисков.

В комплексе мероприятий по оздоровлению хозяйств от вирусных болезней рыб ведущее место также принадлежит диагностике. На данный момент разработан ряд вирусологических и серологических методов, таких как ИФА (различные варианты), НРИФ, тест коагглютинации, иммуноблот. Большинство этих методов требует культивирования вируса на культурах клеток, что занимает достаточно длительное время и выполняется только в крупных научно-исследовательских институтах, имеющих профильные лаборатории. Поэтому в последние годы в России наиболее актуальным является разработка экспресс-методов диагностики, таких как полимеразная цепная реакция. Например, за рубежом уже разработаны и применяются в рутинных лабораторных исследованиях рыб одно- и двухраундные варианты ОТПЦР и ПЦР в «реальном времени».

В настоящее время в России отсутствуют адекватные качественные тест-системы, сочетающие невысокую стоимость анализа, простоту в использовании, а главное – высокую чувствительность. Таким образом, целью настоящего исследования являлась разработка тест-систем для индикации и идентификации вирусов-возбудителей особо опасных и карантинируемых заболеваний карповых и лососевых рыб методом ПЦР.

Для Цитирования:
Е.А. Завьялова, Н.Ю. Кандрина, Н.Ф. Ломакина, М.И. Гулюкин, Индикация и идентификация некоторых особо опасных вирусов рыб методом ПЦР. Рыбоводство и рыбное хозяйство. 2015;3.
Полная версия статьи доступна подписчикам журнала
Язык статьи:
Действия с выбранными: