По всем вопросам звоните:

+7 495 274-22-22

УДК: 579.62

Идентификация возбудителя гафниоза методом MALDI

С. Золотухин д-р биол. наук, проф., ФГБОУ ВО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П. А. Столыпина», Россия, 432017, г. Ульяновск, б-р Новый Венец, д. 1, Е-mail: fvm.zol@yandex.ru
Д. Васильев д-р биол. наук, проф., зав. каф., ФГБОУ ВО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П. А. Столыпина», Россия, 432017, г. Ульяновск, б-р Новый Венец, д. 1
Д. Золотухин канд. биол. наук, ФГБОУ ВО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П. А. Столыпина», Россия, 432017, г. Ульяновск, б-р Новый Венец, д. 1, Е-mail: fvm.zol@yandex.ru

Целью работы явилась идентификация бактерий вида Hafnia alvei методом MALDI в сравнении с бактериологическим методом и методом фагоидентификации. Выделение культур Hafnia alvei проводили по общепринятым методикам с последующем изучением ферментативных свойств. Одновременно полученные штаммы микроорганизмов подвергали идентификации методом «стекающей капли» на плотной питательной среде с использованием специфического бактериофага и на бактериологическом анализаторе времяпролетном MALDI масс-спектрометре (Microfl ex, Bruker Daltonics, Германия). В результате проведенных исследований по ферментативным тестам было идентифицировано как Hafnia alvei 25 штаммов выделенных энтеробактерий, из них 7 штаммов были не чувствительны к специфическому бактериофагу Н-1 УГСХА. Четыре штамма бактерий, не чувствительных к гафниозному бактериофагу, по результатам исследования методом MALDI были идентифицированы как Salmonella spp. и Escherichia spp., видовая принадлежность 21 культуры была подтверждена как Hafnia alvei. Tаким образом, MALDI-метод идентификации микроорганизмов удобен, более специфичен, чем классический бактериологический метод, имеет более широкий диапазон идентификации, чем проба со специфическим бактериофагом, и его можно с успехом применять для идентификации Hafnia alvei.

Литература:

1. Золотухин С. Н. Смешанная кишечная инфекция телят и поросят, вызываемая патогенными энтеробактериями / С. Н. Золотухин, Л. С. Каврук, Д. А. Васильев. – Ульяновск, 2005. – С. 5–8.

2. Mojtabaee A. Enterobacter hafniamenin gitis / A. Mojtabaee, A. Siadati // J. Pediatr. – 1978. – V. 93. – P. 1062–1063.

3. Reina J. Acute gastroenteritis caused by Hafnia alvei in children / J. Reina, J. Hervas, N. Borrell // Clin. Infect. Dis. – 1993. – V. 16. – P. 443.

4. Золотухин С. Н. Неспецифическая профилактика смешанной кишечной инфекции телят и поросят / С. Н. Золотухин, Л. П. Пульчеровская, Л. С. Каврук // Практик. – 2006. – № 6. – С. 72.

5. Золотухин С. Н. Малоизученные энтеробактерии и их роль в патологии животных. – Ульяновск, 2004. – С. 64 – 75.

6. Новиков В. Б. Пчелы, цветы и здоровье // Пчеловодство. – 2005. – № 1. – С. 12–15.

7. Gaskell S. J. Electrospray: principles and practice // J. Mass Spectrom. – 2000. – № 35. – P. 677–688.

8. Васильев Д. А. Методы общей бактериологии: учебно-методическое пособие / Д. А. Васильев, С. Н. Золотухин, Н. М. Никишина. – Ульяновск, 1998. – 150 с.

9. Методические рекомендации по индикации и идентификации энтеробактерий вида Morganella morganii в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 4 октября 2004 г.) / С. Н. Золотухин, А. Ю. Кузнецов, Д. А. Васильев, Л. С. Каврук. – М.: РАСХН, 2005. – 16 с.

10. Методические рекомендации по индикации и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки E. coli O157:Н7 и О157:Н- в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 4 октября 2004 г.) / С. Н. Золотухин, Н. И. Молофеева, Д. А. Васильев, Л. С. Каврук. – М.: РАСХН, 2005. – 16 с.

11. Методические рекомендации по индикации и идентификации энтеробактерий рода Citrobacter в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 4 октября 2004 г.) / С. Н. Золотухин, Л. П. Пульчеровская, Д. А. Васильев, Л. С. Каврук. – М.: РАСХН, 2005. – 16 с.

12. Методические рекомендации по индикации и идентификации энтеробактерий рода Klebsiella в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 26 июня 2006 г.) / С. Н. Золотухин, Е. А. Бульканова, Д. А. Васильев, Л. С. Каврук. – М.: РАСХН, 2006. – 16 с.

13. Методические рекомендации по индикации и идентификации энтеробактерий рода Proteus в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 26 июня 2006 г.) / С. Н. Золотухин, Н. А. Феоктистова, Д. А. Васильев, Л. С. Каврук. – М.: РАСХН, 2006. – 16 с.

14. Методические рекомендации по индикации и идентификации энтеробактерий рода Enterobacter в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфических бактериофагов (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 26 июня 2006 г.) / С. Н. Золотухин, Е. Н. Пожарникова, Д. А. Васильев, Л. С. Каврук. – М.: РАСХН, 2006. – 16 с.

15. Методические рекомендации по индикации и идентификации энтеробактерий вида Yersinia enterocolitica в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды с применением специфического бактериофага (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 26 июня 2006 г.) / С. Н. Золотухин, Б. М. Коритняк, Д. А. Васильев, Л. С. Каврук. – М.: РАСХН, 2006. – 16 с.

В последние годы значительно возросло количество заболеваний животных и человека, вызванных условно-патогенными микроорганизмами или протекающих с их участием [1]. Одним из таких микроорганизмов является представитель семейства Enterobacteriaceae, относящийся к роду Hafnia с единственным видом Hafnia alvei.

Несмотря на то что Hafnia alvei известны как маловирулентные представители нормальной микрофлоры слизистых оболочек и кожи человека и животных, имеются научные данные о том, что они способны вызывать ряд заболеваний у человека, таких как менингит, гастроэнтероколиты, пневмонии, инфекции мочевыводящих путей и другие воспалительные процессы, а также диарею [2, 3].

Имеются сообщения о гафниях как возбудителях желудочно-кишечных заболеваний у новорожденных телят и поросят-сосунов [1, 4, 5].

Гафниоз пчел зарегистрирован самостоятельной нозологической единицей как заболевание этих насекомых (другое название – «паратиф пчел») [6].

При диагностике гафниоза основной проблемой является то, что на сегодняшний день нет доступного и дешевого метода индикации и идентификации H.alvei, а при использовании классических микробиологических методов (микроскопия, изучение ферментативных свойств) этот микроорганизм трудно дифференцировать от других энтеробактерий, в частности E.coli и Salmonella spp.

Одним из наиболее точных методов индентификации микроорганизмов является MALDI.

MALDI (матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация) – способ ионизации вещества, использующийся при масс-спектрометрии. Масс-спектрометрия – это физический метод измерения отношения массы заряженных частиц вещества к их заряду. В основе метода лежит использование вспомогательного вещества – «матрицы», свойства которой обусловливают понижение деструктивных свойств лазерного излучения и ионизацию анализируемого вещества. Приборы, которые реализуют этот метод, называются масс-спектрометрами.

Принцип MALDI-TOF в массспектрометрии обладает высокой чувствительностью и строгой специфичностью. Он позволяет проводить массспектрометрический анализ белковой фракции исследуемой клетки и получать уникальные для данного вида масс-спектры с высокой точностью и разрешением, обеспечивая высокую воспроизводимость и точность масс, характеризующие исследуемый объект по типу отпечатков пальцев (Gaskell, 2000).

Для Цитирования:
С. Золотухин, Д. Васильев, Д. Золотухин, Идентификация возбудителя гафниоза методом MALDI. Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2017;10.
Полная версия статьи доступна подписчикам журнала
Язык статьи:
Действия с выбранными: