Диагностика на оспу основана на анализе эпизоотологических, клинических, эпидемиологических данных, патологоанатомических изменений, результатах лабораторных исследований и биопробы. При типичном течении болезни ее диагностировать нетрудно. Так, при тщательном обследовании овец пораженной отары всегда можно найти отдельных животных с типичными розеолами и папулами на бесшерстных участках кожи. Диагноз на оспу считают подтвержденным при получении положительного результата одним или несколькими лабораторными методами с учетом предварительного диагноза, поставленного на основании клинико-эпизоотологических и патологоанатомических данных.
В Кыргызской Республике для диагностики оспы из серологических методов используются: реакция связывания комплемента (РСК), реакция нейтрализации (РН), иммуноферментный анализ (ИФА) и полимеразная цепная реакция (ПЦР). Каждый метод наряду с положительными качествами имеет и отрицательные стороны в плане их экспрессности, технической простоты постановки.
Целью научной работы является проведение исследований по оптимизации полимеразной цепной реакции с одной парой праймеров для диагностики оспы овец и коз и дальнейшего изучения генома вируса (табл. 1). Для достижения этих целей необходимо было решить следующие задачи: 1) подбор праймеров для ПЦР; 2) оптимизация параметров ПЦР; 3) секвенирование полученных фрагментов ДНК.
Объектами исследований служили больные животные из разных областей республики. Для исследований использовали пробы крови, кусочки пораженных участков кожи. Выделение вируса оспы проводили коммерческим набором, изготовленным компанией Axygen, также для постановки ПЦР были использованы реагенты компании Qiagen, праймеры.
Проведенный анализ генома ДНК вируса с помощью полимеразной цепной реакции был признан качественным тестом для сравнения родственных вирусов. Показали возможность применения метода ПЦР и уровень различий между различными изолятами вирусов рода capripox, как определено с помощью секвенирования. Эффективность разрабатываемой методики ПЦР во многом зависит от качества выделенной нуклеиновой кислоты. Для оптимизации условий пробоподготовки при проведении ПЦР было испытано несколько способов выделения ДНК из культуральных штаммов, патологического материала. Следует отметить, что причиной ложноотрицательных результатов ПЦР могут быть ингибиторы, присутствующие в некоторых биологических образцах, а также неправильная подготовка проб для выделения ДНК.