Нозореал клещевого энцефалита (КЭ) простирается практически непрерывной полосой по лесной зоне умеренного пояса Евразии — от Атлантического до Тихого океана, включая о. Сахалин и северную часть о. Хоккайдо [1]. Популяции вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) в природных очагах параллельно населяют гостальную и векторную среды своего обитания. При мониторинге активности и для системной оценки природного очага инфекции необходимо исследовать все его составляющие. Поскольку иксодовые клещи могут являться одновременно резервуаром и переносчиком ВКЭ и представляют опасность для человека, именно они чаще всего служат объектом исследования. В настоящее время в каждом регионе Российской Федерации, эндемичном по КЭ, проводятся исследования иксодовых клещей на выявление маркеров ВКЭ с помощью двух экспресс-методов: иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Результаты этих исследований бывает трудно сопоставлять из-за отличий в физико-химической природе и направленности методов [2, 3], а при использовании одного метода — различий чувствительности и специфичности тест-систем разных производителей. Кроме того, наиболее достоверным подтверждением устойчивой циркуляции вируса в конкретном природном очаге является получение изолята в биопробе с последующей идентификацией патогена.
Цель настоящей работы — показать зараженность ВКЭ иксодовых клещей из природных популяций Прибайкалья при проведении комплексных исследований методами ИФА, ПЦР и изоляции вируса на модели лабораторных мышей.
Голодных имаго иксодовых клещей, 97,6 % из которых — Ixodes persulcatus Schulze, 1930, собирали на стандартный флаг из фланелевой ткани в природных очагах КЭ Прибайкалья (Иркутская область и Республика Бурятия) в весенне-летние периоды 2013–2020 гг. Клещей (n = 20 111) исследовали индивидуально, приготавливая из них суспензию на физиологическом растворе (0,5 мл на одного клеща) с антибиотиками (пенициллин 500 ед/мл). Сначала всех клещей исследовали с помощью ИФА (тест-система иммуноферментная для выявления антигена вируса клещевого энцефалита («Микроген», Томск — Москва)) в соответствии с инструкцией производителя. Учет результатов проводили с помощью иммуноферментного анализатора IMARK BioRAD при длине волны 450 нм. Пробу считали положительной, если отношение величины ее экстинкции к величине экстинкции нормального контроля (P/N) было ≥ 2,1. Кроме скрининга с помощью ИФА, проводили выборочное исследование клещей в ОТ-ПЦРРВ (метод случайных выборок; n = 3437), используя набор реагентов «АмплиСенс® TBEV, B. burgdorferis. l., A. phagocytophilum, E. chaffeensis / E. muris-FL» ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва. РНК вируса выделяли с помощью набора «АмплиПрайм® РИБО-преп» ООО «НекстБио», Москва. Обратную транскрипцию проводили при помощи набора реагентов «РЕВЕРТА-L-100» (ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва). Результаты учитывали на термоциклере C1000TM Bio-Rad CFX96TM (США) по значению величины порогового цикла Ct (граничное значение равно 38). Все положительные результаты ИФА также верифицировали с помощью ОТ-ПЦР-РВ.